3/1:20418
2.4.18. СВОБОДНЫЙ ФОРМАЛЬДЕГИД
При отсутствии других указаний в частной монографии применяют метод А. Метод В
применяют для вакцин, в которых для нейтрализации избыточного формальдегида
используют натрия метабисульфит.
МЕТОД А
Для вакцин, применяемых в медицине готовят разведение 1 к 10 испытуемой вакцины.
Для бактериальных анатоксинов, применяемых в ветеринарии готовят разведение 1 к 25
испытуемой вакцины. К 1 мл испытуемой вакцины, разведенной как указано выше,
прибавляют 4 мл воды Р и 5 мл ацетилацетонового реактива Р1. Пробирку помещают на
водяную баню и выдерживают при температуре 40 °С в течение 40 мин. Испытуемые
образцы просматривают вдоль вертикальной оси пробирок. Интенсивность окраски
полученного раствора не должна превышать интенсивность окраски раствора сравнения,
приготовленного аналогично испытуемому раствору с использованием вместо
разведенной вакцины, одного миллилитра раствора формальдегида Р, содержащего 20
мкг формальдегида (СН
2
О) в одном миллилитре.
МЕТОД В
Испытуемый раствор. Испытуемую вакцину разводят водой Р в соотношении 1 : 200.
Если испытуемая вакцина представляет собой эмульсию, готовят эквивалентные
разведения, используя водную фазу, отделенную подходящим способом (см. ниже). Если
для отделения водной фазы применяют одну из методик, описанных ниже, используют
последнее разведение водной фазы в соотношении 1:20.
Растворы сравнения. Готовят растворы, содержащие 0.25 г/л , 0.50 г/л , 1.00 г/л , 2.00 г/л
формальдегида путем разведения раствора формальдегида Р водой Р. Затем готовят
разведения каждого из полученных растворов водой Р в соотношении 1:200.
К 0.5 мл испытуемого раствора и каждого раствора сравнения прибавляют по 5.0 мл
свежеприготовленного раствора 0.5 г/л метилбензотиазолонгидразона гидрохлорида Р,
закрывают пробирки, встряхивают и оставляют на 60 мин. Затем добавляют по 1 мл
реактива железа(ІІІ)хлорида и сульфаминовой кислоты Р и оставляют на 15 мин.
Измеряют оптическую плотность (2.2.25) полученных растворов при длине волны 628 нм.
Содержание формальдегида в испытуемой вакцине определяют по калибровочной кривой,
построенной с помощью растворов сравнения. Результаты испытания считаются
достоверными, если коэффициент корреляции (r) калибровочной кривой составляет не
менее 0.97.
Эмульсии. Если испытуемая вакцина представляет собой эмульсию, водную фазу
отделяют, используя походящую методику, и применяют для приготовления испытуемого
раствора. Используют следующие методики.
a). К 1.0 мл испытуемой вакцины прибавляют 1.0 мл изопропилмиристата Р и
перемешивают. Добавляют 1.3 мл 1 М хлороводородной кислоты, 2.0 мл хлороформа Р и
2.7 мл раствора 9 г/л натрия хлорида Р, тщательно перемешивают. Центрифугируют с
ускорением 15 000 g в течение 60 мин. Водную фазу переносят в мерную колбу
вместимостью 10 мл и доводят объем раствора водой Р до 10.0 мл. Если описанная
процедура не позволяет отделить водную фазу, прибавляют раствор 100 г/л полисорбата
20 Р к раствору натрия хлорида и повторяют процедуру, но центрифугируют с ускорением
22 500 g.
b). К 1.0 мл испытуемой вакцины прибавляют 1.0 мл раствора 100 г/л натрия хлорида Р и
перемешивают. Центрифугируют с ускорением 1000 g в течение 15 мин. Водную фазу
переносят в мерную колбу вместимостью 10 мл и доводят объем раствора водой Р до 10.0
мл.
c). К 1.0 мл испытуемой вакцины прибавляют 2.0 мл раствора 100 г/л натрия хлорида Р и
3.0 мл хлороформа Р, перемешивают. Центрифугируют с ускорением 1000 g в течение 5
мин. Переносят водную фазу в мерную колбу вместимостью 10 мл и доводят объем
раствора водой Р до 10.0 мл.
